Ensaio de Imunoabsorção Enzimática – ELISA

O Ensaio de Imunoabsorção Enzimática ou também chamado Ensaio Imunoabsorvente ligado à Enzima (ELISA, do inglês Enzyme-linked Immunosorbent Assay) é um teste imunológico da quantificação de antígeno ou anticorpo proporcional à concentração destes. Devido a especialidade dos anticorpos, o teste apresenta sensibilidade e especificidade alta.

O teste é capaz de detectar pequenas concentrações de antígenos ou anticorpos presentes no soro de um paciente. Sua metodologia apresenta quatro variações distintas: ELISA direto, indireto, sanduíche e ELISA competitivo.

1. ELISA Direto: Considerado o mais simples dos quatro métodos, neste, o antígeno é inicialmente imobilizado na placa, em seguida, acrescenta-se um anticorpo primário ligado à uma enzima e  um substrato cromogênico responsável por gerar a densidade colorimétrica da reação. Essa técnica é bastante utilizada para os testes de gravidez na detecção do β-HCG.
2. ELISA indireto: Nesta técnica, utilizar-se-á um anticorpo primário e outro secundário. A amostra será preparada com o anticorpo primário. Em seguida, introduz-se o antígeno que ligar-se-á ao anticorpo. Próxima etapa, faz-se uma lavagem para retirada de antígenos que não formaram ligação. Após este processo, introduz-se o anticorpo secundário que, conseguintemente, liga-se ao anticorpo primário. Esse método aumenta a especificidade do teste uma vez que remove da amostra possíveis interferentes. Técnica utilizada para diagnóstico da Doença de Chagas.
3. ELISA sanduiche: Nesta técnica, inicia-se com a ligação dos anticorpos de captura à placa de teste seguida da introdução da amostra. Os antígenos específicos a serem detectados na reação ligam-se aos anticorpos de captura inicialmente imobilizados na placa. Segue-se a uma lavagem para remover os não ligantes. Em seguida, os anticorpos conjugados a enzima são inseridos evitando dessa forma que não se sobreponham aos epítopos. Estes segundos anticorpos necessitam, também, serem lavados para remoção daqueles que não ligaram. Essa técnica é utilizada para o teste de terceira geração para detecção do HIV.
4. ELISA competitivo: nesse método, um antígeno marcado compete com o antígeno da amostra pelos sítios de ligação do anticorpo. Por conseguinte, quanto menor a concentração de antígeno na amostra, maior serão as ligações do antígeno marcado ao anticorpo, gerando um sinal de detecção mais forte. Destarte, a detecção de concentração de antígeno na amostra, diferentemente dos outros métodos, será inversamente proporcional, uma vez que ambos os antígenos irão competir pelos mesmos sítios de ligação, aquele que apresentar maior concentração no meio favorecerá essas ligações. Pode ser utilizado para identificar marcadores sorológicos das hepatites A (anti-HAV) e B (anti-HBc e anti-HBe).